将自然风干的4种中药材粉碎,过100目筛,称取20g,加80%乙醇200mL,28℃、150r/min恒温振荡提取12h,再经超声波提取25min,过滤。滤液置于4℃冰箱中保存备用。采用梯度稀释法将4种中药材粗提物分别稀释为100.0、10.0、1.0、0.1mg/mL。
将新鲜的带有蚜虫的桃叶带回实验室,除去死蚜及过大和过小的蚜虫,保留个体一致的中等活蚜,使每片桃叶上的蚜虫数量保持在40头左右,并统计具体虫口数量。采用浸虫浸液法将有蚜虫的桃叶一起浸入提取液中,5s后取出,自然晾干,蒸馏水处理作为对照组。每处理3个重复。晾干后,用浸水棉球裹住桃叶基部,使叶片保持新鲜,放入垫有滤纸的培养皿(Φ=9cm)中进行观察。
将有蚜虫的桃叶分别浸入浓度为100.0、10.0、1.0、0.1mg/mL的提取液中,进行毒力测定。
死亡率(%)=死亡虫数/供试虫数×100;
校正死亡率(%)=(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100。采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析,用Duncan’s新复极差法(DMRT)进行差异显著性分析,并计算4种中药材提取物的毒力回归方程、致死中浓度(LC50)及95%置信区间。
由图1可知,4种中药材提取物原液对桃粉蚜均有不同程度的触杀活性,且校正死亡率随接触时间的延长而升高。其中,蛇床子和苍耳对桃粉蚜的触杀活性较强,在接触12h时校正死亡率即可达75.00%以上。防风提取物在12h和24h的校正死亡率分别为46.06%和88.71%,增幅为92.60%。麻黄提取物的校正死亡率在两个触杀时间段内增加幅度较一致。4种中药材提取物在触杀时间为48h的校正死亡率均接近100%。
由表2可知,不同浓度的4种中药提取物对桃粉蚜均有不同程度的触杀活性,且校正死亡率随提取物浓度的升高而提高。当浓度为10.0mg/mL时,4种中药材提取物的24h校正死亡率均在50%以上;当浓度为1.0mg/mL时,只有麻黄提取物的48h校正死亡率低于50%。总的来说,4种中药材提取物24h和48h的校正死亡率均为蛇床子>苍耳>防风>麻黄。方差分析表明,除了蛇麻子24h的校正死亡率外,各提取物不同浓度24h和48h的校正死亡率均存在显著差异。
由表3可知,24h对桃粉蚜毒力最强的是蛇床子提取物,LC50值为0.346mg/mL;苍耳和防风提取物对桃粉蚜的毒力次之且二者的LC50值较为接近;麻黄提取物对桃粉蚜的毒力最弱,LC50值为1.278mg/mL。48h对桃粉蚜毒力最强的是苍耳提取物,LC50值为3.300×10-3mg/mL;蛇床子和防风提取物对桃粉蚜的毒力相当,LC50值分别为4.743×10-3mg/mL和4.767×10-3mg/mL。
蛇床子、苍耳、防风和麻黄是常用的传统中药,主要含有苷类、醇类、酯类、香豆素类、多糖类、有机酸类、聚乙炔类等成分。蛇床子可以防治多种蚜虫,其主要成分蛇床子素已被开发为生物农药应用于防治包括蚜虫在内的多种害虫。多数菊科类植物含有丰富的具有杀虫作用的生物碱,其中苍耳对蚜虫、菜青虫、红蜘蛛等多种害虫具有显著的防治及杀灭作用。防风提取物对斜纹夜蛾的生物活性有一定的影响。
本试验是在室内条件下进行,可以保证提取药液与供试蚜虫充分接触,但与田间的实际环境条件有一定差异。因此,4种中药材提取物在田间对桃粉蚜的作用效果还需进一步研究。同一种植物在不同溶剂和萃取剂中所获得的提取物的种类和数量可能会有差异,加之本试验中应用的是粗提物,若要在田间进行药效试验,还有待进一步对其活性成分进行分离纯化。另外,为了降低生产成本,使小农户可以负担并采用安全的防控产品,继续探索利用廉价溶剂加工和提取植物杀虫剂成为了一个亟需解决的科学问题。
4种中药材提取物原液对桃粉蚜均有不同程度的触杀活性,且桃粉蚜的校正死亡率随着接触时间的延长而升高;4种提取物对桃粉蚜的校正死亡率随提取物浓度的升高而升高,且24h和48h的校正死亡率均为蛇床子>苍耳>防风>麻黄;24h对桃粉蚜毒力最强的是蛇床子,LC50值为0.346mg/mL,48h对桃粉蚜毒力最强的是苍耳,LC50值为3.300×10-3mg/mL。
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